【转染小课堂】带你了解转染的奥妙和神奇！

转染(Transfection):是真核细胞主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。

原理：将DNA导入细胞使得它可利用细胞自身的细胞机制表达和合成蛋白质，将RNA导入细胞则是用来通过终止翻译来降低某特定蛋白的合成。

转染的RNA在细胞质中发挥作用，DNA则需被转运到细胞核中从而达到有效的转染。在核内，DNA会被短暂表达或整合到基因组DNA而将该遗传改变传代到下一代细胞。

转染类型：

瞬时转染：外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此，一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析，在转染后24-96h内分析结果。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。

稳定转染：外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可以作为一种游离体整合到宿主细胞中。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。

转染方式：

正向转染：细胞培养板中先加入细胞然后再加入转染复合物的方法。例如：DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法、脂质体介导法、非脂质体的脂质活化的树枝状分子介导法、病毒介导法等。

反向转染：核酸和转染试剂复合物先加入到孔板中，然后再向小孔中加入细胞。例如：显微注射、电穿孔、基因枪等。

化学方法:使用载体分子中和或使带负电荷的核酸带正电荷，包括DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法、非脂质体脂质分子介导法、阳离子脂质体转染、通过其他阳离子聚合物(如聚乙烯，PEI，活化的树枝状分子介导法)。

生物方法:依靠病毒包装将非病毒基因转移到细胞中的方法(也称为转导)，包括病毒介导法。

物理方法:将核酸直接递送到细胞质或细胞核中，包括显微注射、电穿孔、基因枪。

转染影响因素：

核酸类型：质粒DNA，mRNA，siRNA，miRNA的mimic和inhibitors...

细胞密度：一般来说，当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。

细胞类型：如原代细胞、贴壁细胞、悬浮细胞、神经细胞、肿瘤细胞、昆虫细胞等。

细胞系的健康程度和存活力

转染试剂类型:脂质体、非脂质体的脂质和活化的树枝状分子。

北京百奥创新科技有限公司提供多种形式和规格的转染试剂，供您选择：

一、PEI转染试剂

二、脂质体转染试剂

三、RNAi转染试剂