酵母双杂交文库构建技术服务

酵母双杂交文库构建技术服务介绍
酵母双杂交技术产生以来，主要应用在以下几个方向：
1、检验一对功能已知蛋白间的相互作用。
2、 研究一对蛋白间发生相互作用所必需的结构域。
3、 用已知功能的蛋白基因筛选双杂交cDNA文库，以研究蛋白质之间相互作用的传递途径。
4、分析新基因的生物学功能，即以功能未知的新基因去筛选文库。通常依靠报告基因的转录激活来鉴定蛋白相互作用。将一个基因克隆到"诱饵"载体，并和GAL4蛋白的DNA结合域(DBD)表达为融合蛋白。将第二个基因或者编码可能的相互作用子蛋白的cDNA文库克隆到"猎物"载体，同GAL4的转录激活域(AD)表达为融合蛋白。当两个蛋白相互作用时，AD和DBD间距离被拉近，从而激活报告基因的表达。
本服务项目使用infusion重组系统进行重组，使用zhuan利的cDNA合成方法进行cDNA的合成。
实验步骤
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分离
1.3.cDNA合成（使用酶促法直接合成，不经过PCR扩增过程，比SMART方法质量大大提高）
1.4.cDNA长度分级
1.5.分级后的cDNA与酵母双杂载体(pGADT7、pGADT7-REc2、pDEST22、pB42AD、pPR3N等载体，或者客户载体)进行infusion重组。
1.6.重组后产物电转化感受态细胞
1.7.文库铺板检测与菌液保存
1.8.文库质粒提取
产品内容
我们提供构建好的酵母文库的甘油菌液（含20%甘油的LB培养基），文库甘油菌，随机克隆子的PCR鉴定图谱，文库构建报告，酵母双杂交筛选相关细胞和质粒。
质量标准
3.1文库库容量：大于1*10^7CFU。
3.2平均插入片段：大于1.2Kbp。
3.3阳性率：大于95%。
服务时间
20个工作日内
备注1：该酵母文库可以选择增加均一化处理步骤，我们使用DSN法均一化方法，可以构建出高质量的均一化酵母杂交文库，可以大大减少后续酵母筛选的工作量和筛选效率等。
提供的产品
详细的实验报告
酵母双杂交（酵母单杂交）文库质粒、菌液
备注2：如果客户需要转化酵母，我们可提供100管酵母甘油菌工作液及母液（同clontech）。
服务周期
获得合格的总RNA后25工作日，如需转化酵母延长15个工作日。
材料要求
客户构建的酵母双杂交cDNA文库，由客户提供组织、细胞或总RNA给我们即可：细胞样本：细胞数量大于1*10^7
动物样本：大于1g
物样本：大于2g
总RNA：大于200u
服务流程 
1、提交项目课题相关需求和资料。 
2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。 
3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。 
4、双方均满意并达成一致，签订技术服务合同。 
5、开展实验，按期完成合同规定的内容。 
6、结题，提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。 
咨询与订购 
感谢您选择我们的服务，如果您有任何问题，请联系我们，我们将竭诚为您解答和服务。